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| 使用presens光學(xué) pH 傳感器在攪拌罐式生物反應器中進(jìn)行細胞培養監測 |
| 點(diǎn)擊次數：76 更新時(shí)間：2025-02-05 |
使用presens光學(xué) pH 傳感器在攪拌罐式生物反應器中進(jìn)行細胞培養監測
我們使用 PreSens 新型可高壓滅菌光學(xué)傳感器點(diǎn)以及新型 pH 探頭進(jìn)行在線(xiàn)細胞培養監測。將光學(xué)測量值與梅特勒-托利多探頭的參考數據進(jìn)行比較。在第一個(gè)實(shí)驗階段，我們評估了連接到生物反應器壁上的 pH 傳感器點(diǎn)的信號穩定性、點(diǎn)間變化和漂移。這些點(diǎn)與參考測量值呈趨勢，并且隨著(zhù)時(shí)間的推移僅顯示出最小的漂移。第二個(gè)實(shí)驗階段側重于 pH 探頭的評估，該探頭與梅特勒-托利多探頭的趨勢也很好。
監測和控制重要的培養參數，如 DO 和 pH 值是哺乳動(dòng)物細胞培養的前提條件。不利的條件可能會(huì )損害生長(cháng)，甚至導致培養失敗。因此，需要精確且長(cháng)期穩定的傳感器，這些傳感器可以在生物反應器中實(shí)施。 材料和方法 將光學(xué) pH 傳感器點(diǎn) （SP-LG1） 連接到 3 L 玻璃生物反應器的內生物反應器壁上。在生物反應器熱套上切一個(gè)孔，以便可以通過(guò)聚合物光纖從外部讀取傳感器點(diǎn)。對裝有光學(xué)傳感器的反應器進(jìn)行高壓滅菌。在接種 CHO 細胞系之前立即對傳感器點(diǎn)進(jìn)行單點(diǎn)校準。使用 Applikon EZ 控制器控制生物反應器的 pH 值，設定值為 7.00 ± 0.05。 結果 圖 2 顯示了細胞培養中 15 天監測期的 PreSens pH 測量值和參考數據。在這項研究中，在接種前對 PreSens 斑點(diǎn)進(jìn)行了單點(diǎn)調整。在研究的其余部分，對控制系統的梅特勒-托利多探頭進(jìn)行了樣品校正，但 PreSens 斑點(diǎn)和第二個(gè)梅特勒-托利多探頭沒(méi)有再次進(jìn)行樣品校正。實(shí)驗應確定光學(xué)傳感器的性能和可能的漂移。參考探針的光學(xué) pH 讀數趨勢良好，從第 11 天開(kāi)始僅顯示出很小的漂移（圖 3）。在整個(gè)研究過(guò)程中，PreSens 測量中看到的峰值發(fā)生在手動(dòng)監測點(diǎn)的每日讀數期間。
圖 2：在 3 L 攪拌罐式生物反應器中監測細胞培養，該反應器帶有光學(xué) pH 傳感器點(diǎn)（藍色）和梅特勒-托利多探頭（橙色用于控制，灰色用于監測）。pH 點(diǎn)與參考測量值呈趨勢。 在離線(xiàn)采樣期間，每天一次，在三個(gè)非連續點(diǎn)之間手動(dòng)移動(dòng)光纜，以測試點(diǎn)間的變化和漂移。圖 3 顯示 4 個(gè)點(diǎn)在不同程度上漂移。點(diǎn) 1 是持續監測的點(diǎn)。點(diǎn) 2 放置在加熱夾套窗口中，使其可以在整個(gè)研究過(guò)程中暴露在光線(xiàn)下。點(diǎn) 3 和 4 位于加熱套后面，光照有限。10 天后，到第 15 天，連續監測點(diǎn)漂移約 - 0.1 pH 單位，漂移 - 0.2 pH 單位。曝光點(diǎn)（點(diǎn) 2）漂移 - 0.3 pH 單位，比所有其他點(diǎn)都多。兩個(gè)曝光受限的點(diǎn)和第二個(gè)梅特勒-托利多探頭的漂移最小。這些數據表明，pH 點(diǎn)對恒定的光照非常敏感。
圖 3：在 15 天的監測期內，光學(xué) pH 傳感器點(diǎn)與校正探頭的 pH 值偏差。11 天后可以看到 -0.1 pH 的漂移。 在下面的實(shí)驗中，使用 PreSens 的 pH 傳感器點(diǎn)和 pH 探頭原型進(jìn)行監測，并與對照梅特勒-托利多探頭進(jìn)行比較（圖 4）。PreSens pH 點(diǎn)和探頭以及梅特勒-托利多探頭每天進(jìn)行一次單點(diǎn)校準。傳感器點(diǎn)和鋼探針都與參考測量值呈趨勢。pH 探頭顯示信號噪聲較多，原因可能是對氣泡的敏感度較高。
圖 4：在 3 L 攪拌罐式生物反應器中監測細胞培養：使用 PreSens 傳感器點(diǎn)（藍色）和原型探頭（橙色）進(jìn)行光學(xué) pH 測量，與使用梅特勒-托利多探頭（灰色）的參考測量值進(jìn)行比較。探頭和點(diǎn)都與參考測量值呈趨勢。 結論 我們對可高壓滅菌的光學(xué) pH 傳感器點(diǎn)和原型不銹鋼探頭的評估表明，這些傳感器適用于哺乳動(dòng)物細胞培養中的 pH 值監測。當探頭端口數量有，非侵入式傳感器點(diǎn)具有多種優(yōu)勢?？梢栽谏锓磻鞯牟煌恢眉啥鄠€(gè)點(diǎn)，這可能會(huì )提供有關(guān)混合效應的更多信息。隨著(zhù)時(shí)間的推移，傳感器僅顯示最小的漂移，并且與參考探頭呈趨勢一致。但是，PreSens 傳感器確實(shí)具有信號噪聲和光敏性。在我們研究的下一階段，光學(xué) pH 探頭將連接到控制器和用于控制培養 pH 值的信號。 |
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